Většina buněčných složek je bezbarvá a nelze je pod mikroskopem jasně rozlišit. Základním předpoklademfluorescenční mikroskopieje barvení součástí barvivy.
Fluorescenční barviva, známá také jako fluorofory nebo fluorescenční barviva, jsou molekuly, které absorbují excitační světlo dané vlnové délky (obvykle UV) a po krátké prodlevě emitují světlo o delší vlnové délce. Zpoždění mezi absorpcí a emisí je zanedbatelné, typicky v řádu nanosekund.
Emitované světlo pak může být odfiltrováno z excitačního světla, aby se odhalilo umístění fluoroforu.
Fluorescenční mikroskopie využívá k osvětlení vzorku intenzivnější světlo. Toto světlo excituje fluorescenční materiál ve vzorku, který pak vyzařuje světlo o delší vlnové délce.
Výsledný obraz je založen na emisní vlnové délce druhého světelného zdroje nebo fluorescenční látky jiné než světlo původně použité k osvětlení a excitaci vzorku.
zpracovává se
Světlo na excitační vlnové délce je zaostřeno na vzorek přes čočku objektivu. Fluorescence vyzařovaná vzorkem je zaostřena na detektor přes čočku objektivu. Protože většina excitačního světla prochází vzorkem, pouze odražené excitační světlo dosáhne objektivu spolu s emitovaným světlem.
formulář
"Fluorescenční mikroskopie" označuje jakýkoli mikroskop, který používá fluorescenci ke generování obrázků, ať už se jedná o jednodušší zařízení, jako je epifluorescenční mikroskop, nebo složitější design, jako je konfokální mikroskop, který používá optické řezy k získání lepšího rozlišení. Fluorescenční obrázek.
Většina používaných fluorescenčních mikroskopů jsou epifluorescenční mikroskopy, kde se excitace fluoroforů a detekce fluorescence provádí stejnou optickou cestou (tj. čočkou objektivu).
