Jedná se o optický mikroskop, ve kterém dochází při průniku světla do neobarveného vzorku k malým světelným odchylkám neboli fázovým posunům. Tyto fázové posuny se promítnou do obrazu, což znamená, že když světlo prochází neprůhledným vzorkem, fázový posun vzorek zesvětlí a vytvoří na pozadí osvětlený (jasný) obraz.
Mikroskopie s fázovým kontrastem vytváří vysoce kontrastní obrazy při práci s průhlednými vzorky, takže to platí zejména pro snímky mikrobiálních kultur, fragmentů tenkých tkání, buněčné tkáně a subcelulárních částic.
Princip fungování mikroskopie s fázovým kontrastem spočívá v použití optických metod k převodu preparátu na amplitudový obraz, který je pozorován okuláry mikroskopu.
PCM lze použít k zobrazení neobarvených buněk (také známých jako fázové objekty), což znamená, že morfologie buněk je zachována a buňky lze pozorovat v jejich přirozeném stavu s vysokým kontrastem a efektivní čistotou. Je to proto, že pokud jsou vzorky obarveny a fixovány, zabijí většinu buněk, což je vlastnost, kterou světelná mikroskopie ve světlém poli nemůže odstranit.
Posuny, ke kterým dochází během pronikání světla, se převádějí na změny amplitudy, což způsobuje kontrast obrazu.
V kombinaci s prvky zvyšujícími kontrast, jako je fluorescence, umožňují lepší prezentaci snímků vzorků.
Části mikroskopu s fázovým kontrastem
Přístrojové vybavení mikroskopu s fázovým kontrastem je založeno na světelné dráze od příjmu světelného zdroje k vizualizaci obrazu.
Jeho sekvence se tedy skládá z:
Světelný zdroj (rtuťová výbojka)
skupinový výstřel
clona
kondenzátor
Prstencový kondenzátor
vzorek
Účel
fotografická deska
polarizované světlo
fázový prstenec
Vlastnosti mikroskopu s fázovým kontrastem
Změna způsobená odchýleným rozptýleným (odchýleným) světlem a neodchýleným světlem, které dopadá na vzorek, kde je absorbováno, se vytváří při určité vlnové délce a vytváří barvu. Rozdíl způsobený rozptýleným světlem a absorbovaným světlem se nazývá změna amplitudy. Tyto změny amplitudy jsou citlivé, a proto je nelze zobrazit fotografickým zařízením, jako je mikroskopie s fázovým kontrastem, a proto jsou viditelné lidským okem.
Kondenzátor mikroskopu s fázovým kontrastem má neprůhledný disk zvaný kobliha, zatímco průhledná kobliha vytváří kužel světla, který prochází vzorkem. Jak se světlo mění, část světla na vzorku se ohýbá v důsledku změn optické hustoty a vytváří obraz na objektivu. Neodchýlené světlo dopadne na fázové prstence na fázové desce, zatímco odchýlené světlo mine fázové prstence, které procházejí přímo fázovou deskou, a vytvoří obraz.
Mikroskopy s fázovým kontrastem jsou navrženy s objektivy, které mohou vykonávat různé funkce, když se používají ve spojení s technikami zvyšujícími kontrast, jako je fluorescence. Objektiv je umístěn ve vnitřní fázové destičce, která mění absorpci světla a fázový posun (tj. nefraktovaný), vytváří široké spektrum pro kontrast vzorku a vytváří silný kontrast na pozadí.
Aplikace mikroskopie s fázovým kontrastem
Určete morfologii živých buněk, jako jsou živočišné a rostlinné buňky
Studujte pohyblivost a pohybovou strukturu mikroorganismů
Detekce určitých mikrobiálních prvků, jako jsou bakteriální endospory
