Typické součásti afluorescenční mikroskopjsou:
Fluorescenční barviva (fluorofory)
Fluorofor je fluorescenční sloučenina, která při excitaci světlem opět vyzařuje světlo.
Fluorofory typicky obsahují několik vázaných aromatických skupin nebo jsou to planární nebo cyklické molekuly s několika π vazbami.
Mnoho fluorescenčních barviv bylo navrženo pro mnoho biomolekul.
Některé z nich jsou malé molekuly, které jsou ze své podstaty fluorescenční a vážou požadovanou biomolekulu. Primárními příklady jsou barvení nukleových kyselin, jako je DAPI a Hoechst, phalloidin, které se používají k barvení aktinových vláken v savčích buňkách.
zdroj světla
Používají se čtyři hlavní typy světelných zdrojů, včetně xenonových obloukových výbojek nebo rtuťových výbojek s excitačními filtry, lasery a vysoce výkonné LED.
Lasery se používají hlavně v sofistikovaných technikách fluorescenční mikroskopie, zatímco xenonové výbojky, rtuťové výbojky a LED s dichroickými excitačními filtry se běžně používají v širokoúhlé fluorescenční mikroskopii.
Budicí filtr
Budič je typicky pásmový filtr, který propouští pouze vlnové délky absorbované fluoroforem, čímž minimalizuje excitaci z jiných fluorescenčních zdrojů a blokuje excitační světlo v pásmu fluorescenční emise.
dichroické zrcadlo
Dichroický filtr nebo tenkovrstvý filtr je velmi přesný barevný filtr používaný k selektivnímu odrážení světla v malém rozsahu barev, zatímco odráží jiné barvy.
Emisní filtr.
Emitor je obvykle pásmový filtr, který propouští pouze vlnovou délku vyzařovanou fluoroforem a blokuje veškeré nežádoucí světlo mimo toto pásmo, zejména světlo excitační.
Filtry zajišťují minimální pozadí odfiltrováním nežádoucí excitační energie (včetně UV a IR) nebo autofluorescence vzorku a systému.
